RT-PCR i QPCR
Lančana reakcija reverzne transkripcijske polimeraze (RT-PCR)
RT-PCR vs. QPCR
Napredak u biotehnologiji rezultirao je otkrivanjem nekoliko načina rješavanja zahtjeva za transplantacijom organa tijekom godina. Prije, pojedinac koji bi volonterski donirao bilo koji organ neposredno nakon smrti pacijentu koji je bio u potrebi, mogao je samo skočiti na operaciju za presađivanje. Kontinuirana istraživanja i istraživanja biologa vode do otkrića matičnih stanica.
Matične stanice se odnose na one koje se uzimaju iz DNA embrija, koji će poslužiti kao izvor za regeneraciju stanica koje bi u osnovi bile klon organa gdje je DNA preuzeta. Dok aktivisti za ljudska prava lobiraju za zaustavljanje takvih postupaka, uspješna operacija doista je dokazala učinkovitost razvoja matičnih stanica u presađivanju organa.
Međutim, prije nego što se može cijeniti i potpuno razumjeti matične stanice, postoji potreba za upoznavanjem s različitim terminologijama povezanim s ovim znanstvenim otkrićem. Uzgoj matičnih stanica bavi se DNA i njegovim kodiranjem. Stoga je od vitalnog značaja za studente ili bilo koje pojedince zainteresirane za polje razlikovati RT-PCR i qPCR.
Lančana reakcija reverzne transkripcijske polimeraze (RT-PCR) jedna je od mnogih varijanti lančane reakcije polimeraze ili PCR. Ova laboratorijska tehnika široko se koristi u molekularnoj biologiji kako bi znanstvenici mogli proizvesti više kopija pojedine sekvencije DNA kroz proces skiciran kao "pojačanje". Razlika između RT-PCR i tradicionalnog PCR je da se RNA prvo transkribira u obrnutom njegov DNK komplement, koji koristi reverznu transkriptazu. Nova komplementarna DNA koja sadrži obrnutu transkripciju potom će se pojačati primjenom tradicionalnog PCR ili real-time PCR.
Većina studenata koji proučavaju ovaj proces često pogriješi izmjenjivanje reverzne transkripcije PCR-a i PCR-a u realnom vremenu, jer su dva skraćena slično. Da bi se izbjegla zbrka, biolozi označavaju real-time PCR kao kvantitativni real-time PCR ili qPCR.
QPCR se jako razlikuje od RT-PCR, jer qPCR je odgovoran za mjerenje pojačanja kao što se događa. Može se reći da RT-PCR pokreće postupak amplifikacije, dok qPCR mjeri kako se postupak odvija.
Kvantitativni real-time PCR
QPCR je zapravo revolucionirala tradicionalnu jednosmjernu metodu pristupa kada je u pitanju kvantificiranje DNA i RNA, budući da primjenom qPCR metode omogućuje biolozima da odrede početnu koncentraciju nukleinske kiseline čak i prije nego što su rezultati reakcije promatrani i zapisano.
Primjena qPCR-a, koja se sada smatra najmoćnijom i osjetljivijom tehnikom analize za genetske studije, značajno se proširila. Trenutno se bavi kvantitativnom analizom genske ekspresije, genotipiziranjem, otkrivanjem patogena i analizom SNP, zajedno s mjerenjima smetnji RNA.
QPCR se često kombinira s procesom reverzne transkripcije za kvantificiranje messenger RNA i MicroRNA prisutnih u stanicama tkiva promatranih i eksperimenata. Ovo zatim daje još jednu vidljivu razliku između dva: RT-PCR se može koristiti za proces amplifikacije, ali treba ga spojiti s qPCR-om za kvantifikaciju.
QPCR je također poznat kao kvantitativniji jer se podaci mogu prikupiti kao faza eksponencijalnog rasta (log) PCR-a. Biolozi napominju da je količina nusprodukta PCR-a izravno proporcionalna količini predložene nukleinske kiseline koja će se mjeriti pomoću qPCR-a.
S druge strane, RT-PCR daleko je od kvantitativne prirode, jer poštivanje intenziteta pojačane vrpce na gelu nakon postavljenog standarda koncentracije može dovesti do "polukvantitativnog" zaključivanja.
Sažetak:
1.QPCR i RT-PCR su oba pojma korištena u biotehnologiji i korištena za proizvodnju višestrukih kopija DNA. 2.RT-PCR se upotrebljava za pojačavanje reverzne transkripcije DNA kodova; QPCR mjeri pojačanje. 3.RT-PCR je za pojačanje, a qPCR je za kvantifikaciju. 4.QPCR je kvantitativan po prirodi, a RT-PCR nije.
